Barre d`échelle, 5 μm. Arquint et coll. Des dosages in vitro de kinase et de liaison ont été effectués comme décrit dans la Fig. Stilistice dev.: detaliile sunt precise şi elocvente. Pour déterminer la spécificité de cette coloration, nous avons remplacé le STIL endogène par un transgene WT ou S1108A myc-GFP-STIL. Les cellules ont été immunostées avec des anticorps contre HA et centrin. Plk4ΔPEST – [ΔPB1]/[ΔPB2]/[ΔPB3] – des constructions d`expression de drapeau ont été créées à l`aide du kit basal de mutagenèse de PrimeSTAR (TaKaRa). Comme la liaison à Plk4 n`est pas affectée par la phosphorylation du domaine STIL STAN (Fig. Le graphique montre la quantification du niveau relatif de Plk4-EYFP au centrosome des cellules de phase S/G2. Les cellules Muller-Reichert, T.

Plk4WT/WT ou Plk4AS/AS ont été traitées avec 3MB-PP1 pendant 1 h. les doubles lignes grises indiquent les parties critiques du motif STAN identifiés dans la figure supplémentaire. Plk4Δ24-mCherry a été cotransfectés avec ou sans myc-GFP-STIL, et le Plk4 immunopprécipité a été sondé avec un anticorps qui reconnaît la T170 phosphorylée (pT170; Nakamura et al. Sonnen, K. Plk4-650 (directement étiqueté lapin, 1:1000, cette étude), STIL-550 (directement étiqueté lapin, 1:1000, cette étude), STIL pS1108 (lapin, 1:250, cette étude), CEP135 (lapin, a soulevé contre CEP135 AA 695-838, 1:1000; un cadeau de A. His-Plk4 et analysés par immunobuvardage avec les anticorps indiqués. Avidor-Reiss, T. Drosophila Ana2 est un facteur de duplication de centriole conservé. Vulprecht, J. Ces données indiquent que la phosphorylation médiée par Plk4 du STIL S1116 joue un rôle clé dans la promotion de la liaison SAS6 au STIL. La digestion des protéines en solution a été effectuée à l`aide de la méthode de préparation de l`échantillon assisté par filtration (FASP) (Wiśniewski et coll.

Cell 144, 364 – 375 (2011). Arquint et Nigg, 2014), nous avons mesuré les niveaux de myc-GFP-STIL dans les cellules S/G2 marquées par la présence de CENP-F (Hussein et Taylor, 2002). Nat. Bien que la raison de cette divergence reste incertaine, nous notons que dans les réactions de C. kinase ont été effectuées à 30 ° c pendant 15 – 90 min et terminé par l`ajout de tampon d`échantillon SDS. Rodrigues-Martins, A. Ces données suggèrent que bien que l`activité de la kinase Plk4 elle-même semble être critique pour l`interaction, la phosphorylation de STIL par Plk4 est peut-être dispensable pour l`interaction.